在生物制藥實驗中,準確和可靠地測定藥物的含量是非常重要的。為了保證實驗結果的準確性,以下是一些實驗技巧和注意事項:
1. 過濾溶液:當乙醇溶解主成分后,輔料不能溶解,并需要過濾。離心方法是一種常用的過濾方法,通過離心使輔料沉淀,并取上清液。注意,在離心過程中,部分離心管沒有塞子,可以使用柔軟的塑料薄膜袋和橡皮筋代替。與薄膜過濾法相比,離心過濾法不會對測定結果產生影響。此外,如果過濾操作不夠快速,乙醇易揮發,可能會影響測定結果。
2. 超聲波分散:在檢驗吲噠帕胺片的含量時,使用超聲波超聲可以使片劑更易分散,可以溶解主成分,并且沒有浪費。與研磨轉移方法相比,超聲波分散對含量均勻度測定沒有影響,且更簡單方便。
3. 控制溶劑濃度:在檢測中藥材的浸出物時,一定要按照標準控制好溶劑的濃度(如乙醇等),否則檢驗結果可能會有很大的差異。
4. 對照品與供試品混合:在液相鑒別中,當供試品與對照品出峰時間不一致時,無法判斷是否合格。可以將對照品與供試品各半配成混合溶液后進行進樣,如果峰寬未變寬,未出現駝峰,則可判斷為合格。
5. 考慮理化性質分離雜質:在進行原料殘留物檢測時,如果主藥對雜質有干擾,現有方法無法檢出。在自建方法時,要優先考慮利用理化性質將雜質分離出來,然后再進行測定,往往會取得意想不到的效果。
6. 生物制藥實驗中要考慮展開劑的溫度與配制順序:在進行藥材薄層色譜鑒別時,應該考慮展開劑的溫度與配制順序。有時,這可能會對色譜的結果產生影響。
7. 非規定色譜柱和調整標準溶液濃度:在進行有機溶劑殘留量檢查時,不一定要堅持使用規定的色譜柱。通常情況下,DB-624色譜柱可以滿足要求。此外,取樣量也可以靈活調整,標準溶液濃度根據限度進行相應調整即可。
8. 飽和時間要夠:在進行薄層色譜鑒別時,飽和時間一定要夠長。
9. 控制流動相pH值:在使用HPLC測定物質含量時,如果流動相中使用了緩沖鹽,一定要注意其pH值。因為在放置過程中,流動相的pH值可能會發生變化,而某些藥物對這種變化非常敏感。
10. 控制溫度:在使用HPLC測定物質含量時,溫度的控制極其重要。最好使用帶有柱溫箱的設備,如果沒有,則需在裝置中保持恒溫后再進行測定,否則可能出現基線飄移,結果不準確。
11. 特定品種對溫度敏感:某些藥物對溫度的影響非常大。例如,有些品種的對照品溶液不能放在冰箱中,甚至需要在液相室內開空調,并在第二天才能使用。
12. 使用微量移液槍要注意"重壓輕打":在使用微量移液槍時,要注意正確施加力量,以確保加液的準確性。
13. 分液加速:在進行一些乳膏的含量測定時,常使用提取分液。在分液時,如果兩相的分界不清晰,可以加入少量的飽和氯化鈉溶液。這樣可以使分層更加明顯。
14. 強調溶解時間:呋喃唑酮溶解較慢,溶解時間一定要足夠長。
15. 避免干擾峰:在使用HPLC測定物質含量時,最好使用流動相溶解樣品。否則,容易產生干擾峰,影響結果。特別注意可能出現的倒峰情況。
16. 分層加速:在低溫環境下進行中藥制劑的萃取時,往往會出現乳化現象,即兩相不容易分層。這時可以加入少量的飽和氯化鈉溶液,或者使用電吹風對分液漏斗進行加溫,或者用熱抹布覆蓋,可以加速分層過程。
17. 注意試劑的含水量:在非水滴定中,試劑的含水量對結果有較大影響。例如,更換不同廠家的冰醋酸,實驗結果可能會有差異。
18. 加快過濾速度:對于比較稠或量少的中藥制劑溶液,在濾紙過濾之前,可以先通過離心使其分層,然后再過濾。這樣可以加快過濾速度,減少有機溶劑的揮發(尤其是在環境溫度較高時)。
19. 清洗檢測器:在使用高效液相色譜儀測定人參、麻黃的含量時,由于檢測波長為邊緣波長(如203nm、207nm),通常一次檢測不能成功。尤其是在使用一段時間后,檢測器效果可能會下降。可以卸掉色譜柱,直接連接檢測器,使用0.1%鹽酸清洗檢測池4小時,效果會有所改善。
20. 使用色譜純試劑處理:在使用高效液相色譜儀測定含量時,可以使用色譜純試劑處理對照品和樣品,以減少誤差。
以上是一些生物制藥實驗中的實驗技巧和注意事項,這些技巧和注意事項的應用可以提高實驗結果的準確性和可靠性。正確的實驗操作和細致的注意事項對于藥物研究和開發較為重要。更多實驗室儀器、實驗設備、實驗耗材、實驗試劑可以進入蘇州阿爾法生物實驗器材網站進行了解。