PCR耗材包括PCR管(EP管)、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質一般為聚丙烯PP材質,具有高品質、高純度、高透明的特點,一般都在潔凈空間生產加工。
PCR耗材為什么一般都是PP材質的呢,為什么需要環境潔凈?
因為PCR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸,而聚丙烯(PP)材質是生物學惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有著良好的化學耐性,及溫度耐受性(可以121℃ 高壓滅菌,也可以承受熱循環過程中的溫度變化)。
這里強調一下耗材質量(是否干凈)的重要性。PCR耗材必須保證沒有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細菌和DNA酶,但不能去除灰塵和DNA殘留,它們可能會抑制PCR反應或產生非特異性擴增。物質是具有吸光度的,即便是很小的污染物也會吸收反應體系中的熒光,影響熒光信號的采集。因此,在生產這些塑料耗材時,從制模到最終的包裝都必須在具有顆粒數量限制的設施環境中進行。
高熱傳遞性
1)極薄的壁厚優化熱傳遞減少循環時間。
之前買的PCR板/管材質厚度不一,是不是厚點的穩定性更好呢?
不是的,管壁厚度會直接影響熱傳導率,極薄的壁厚可優化熱傳遞減少循環時間。要想提升PCR反應效率,保證反應穩定高效進行,需要選擇均一、超壁薄的PCR耗材。
高反射熒光信號
1)qPCR更推薦使用優質的白色PCR耗材。
2)管蓋:高透光性,蓋子的光通過率直接關系著儀器的信號采集,選擇一款透光性高的蓋子對熒光定量檢測極其重要。
不同顏色的PCR管/板,該怎么選呢?
對于普通的PCR反應選用透明或者彩色的PCR管都是可以的,而彩色透明的PCR管更有助于進行樣品分類管理。但qPCR更推薦選用優質的白色PCR耗材。由于qPCR需要實時定量檢測熒光信號強度,更需要靈敏、精確的熒光信號傳遞。實驗證明,與傳統的透明PCR產品相比,白色PCR產品可大程度地反射熒光信號,減少孔間信號交叉污染,可優化實時熒光定量PCR的結果。
高防污染性
1)蓋子要緊密,蓋子與管子的適配性要好,可以減少交叉污染。
2)PCR板要具有升孔緣,有利于密封。
3)一端有手持條,聯排蓋一端要有突出的手持端,開蓋減少污染。
為什么有的PCR板孔是凸出的,有的卻是平的呢,哪個更好?
適合的才是好的。常見的PCR板有平孔緣和加高孔緣兩種。
平孔緣的反應板,可適用于大多數的PCR儀。
升孔緣的反應板,便于封膜,可降低樣品間的交叉污染風險。
高辨識性度
1)具有數字字母標識,有助于識別單個孔及樣品位置。2)具有切角,便于辨認方向。
對于96孔或者384孔板,為什么切角和標識都不是很相同呢?
這是由切角和標識的作用決定的。
切角:PCR板的切角位置選擇取決于適配儀器要求,便于定位。
標識:PCR板的數字字母標記有助于識別單個孔及樣品位置。一般為凸出的顏色數字標識或者印刻標識。對于一些自動化應用實驗,印刻標記的反應板密封性會更好。
體積精確
1)密封性:緊密的蓋子,或者其他方式比如封膜減少蒸發。
不同體積的PCR管/板,該怎么選呢?
選擇宗旨:依據具體的實驗要求選用合適的產品。PCR管的體積大多數都可以滿足PCR反應的要求。在此基礎上,推薦優先選用低容管。因為低容反應管/板有著較小的上方空間,可提高熱傳導率并降低蒸發。同時,在加樣時需要避免加樣過量或過少。過量會導致熱傳導率下降,溢出及交叉污染,而過少可能會造成樣品蒸發損失。
常見反應管的規格及體積:
單管/8聯管/12聯管:0.5mL,0.2mL,0.15mL,0.1mL
96孔板:0.2mL,0.15mL,0.1mL
384孔板:0.04mL
易操作性
PCR耗材操作起來簡單易行,如:蓋子好蓋但不影響密封性等。PCR耗材要與PCR儀器適配性好。
對于96孔或者384孔板,為什么有的有裙邊,有的沒有呢?
其實PCR/qPCR板的裙邊是為了更好地適應自動化應用,可為儀器提供穩定的支持和機械耐受強度,且移液過程中的穩定性也會更高。PCR板一般分為無裙邊、半裙邊、全裙邊。
無裙邊板:可適用于大多數的PCR儀或qPCR儀,但不適用于自動化應用。移液過程中穩定性不高,需要配合板托使用。半裙邊板:可適配標簽或應用條碼,及自動化應用,且有著較好的移液穩定性。全裙邊板:非常適用于自動化實驗應用,也可適配標簽及應用條碼。機械強度較好,可適用于凸出模塊的PCR儀,且移液過程中穩定性高。
PCR封板膜有好多種類型,哪種實驗效果更好呢?
根據具體的PCR實驗要求選用適配的高質量封板膜,不僅能有效地保護樣品,防止污染,還可以提供可信賴的實驗檢測數據。
提供溫度耐受性和密封性強、高透明度、操作簡便的高質量PCR/qPCR膜。
蘇州阿爾法生物提供的PCR耗材包括:0.2mlPCR管、PCR8聯排管、八排管、96孔PCR板、酶標板、封板膜等,同時提供熒光定量PCR儀、凝膠成像儀、電泳儀等實驗室儀器設備等。