免疫測(cè)定 (IA) 是極其重要的生物分析方法，免疫測(cè)定的原理及免疫測(cè)定方法用于量化溶液中從小分子到大分子的分析物（血清、毒素、激素等），使用抗體或抗原作為生物識(shí)別劑。通常應(yīng)用于廣泛的科學(xué)學(xué)科，包括生物制藥分析、臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)和食品檢測(cè)。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

1917 年，奧地利生物學(xué)家卡爾·蘭德施泰納 (Karl Landsteiner) 開(kāi)發(fā)了分析具有抗原特性的小分子的方法。他的方法成為發(fā)展免疫分析的框架。從 1995 年到 2017 年，科學(xué)家們開(kāi)發(fā)了廣泛的免疫測(cè)定法，可以對(duì)生物樣品進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。

IA在臨床決策中起著至關(guān)重要的作用，因此對(duì)于醫(yī)療保健環(huán)境來(lái)說(shuō)是較為重要的。大多數(shù)免疫測(cè)定方法基于放射免疫測(cè)定（RIA）和酶免疫測(cè)定（EIA）。一種常見(jiàn)的 EIA 類型是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA)，它有許多應(yīng)用。ELISA 和 RIA 試劑盒均可在市場(chǎng)上買(mǎi)到，用于檢測(cè)各種分析物。這些測(cè)定法具有*的特異性和敏感性，因此可作為大量分析物（抗原）的金標(biāo)準(zhǔn)。免疫測(cè)定的主要優(yōu)點(diǎn)包括價(jià)格低廉、檢測(cè)低水平分子的能力、準(zhǔn)確性和廣泛的適用性。  

免疫測(cè)定原理

為應(yīng)對(duì)細(xì)菌和病毒等外來(lái)物質(zhì)或抗原，所有動(dòng)物和人類都會(huì)通過(guò)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體。抗體是 Y 形抗原特異性蛋白質(zhì)，可在特定位點(diǎn)與抗原結(jié)合。如上所述，免疫測(cè)定基于抗體-抗原結(jié)合關(guān)系來(lái)檢測(cè)溶液中的特定分子。       

科學(xué)研究中使用的不同類型的來(lái)進(jìn)行免疫測(cè)定。

當(dāng)前的免疫測(cè)定方法主要有以下幾種：

1.放射免疫分析 (RIA)

放射免疫測(cè)定法使用抗體來(lái)量化生物樣品中存在的抗原量。這種檢測(cè)非常靈敏和特異，因此它可以檢測(cè)到樣品中低至幾個(gè)象形圖的抗原。RIA 的基本原則是競(jìng)爭(zhēng)性約束。在該方法中，目標(biāo)抗原使用放射性同位素標(biāo)記并與其特異性抗體結(jié)合。

放射性抗原與非放射性抗原（來(lái)自血清樣品）競(jìng)爭(zhēng)固定數(shù)量的受體結(jié)合位點(diǎn)或抗體。抗體的競(jìng)爭(zhēng)導(dǎo)致一定數(shù)量的標(biāo)記抗原的釋放，因此它與標(biāo)記抗原與未標(biāo)記抗原的比例成正比。

在增加未標(biāo)記抗原的濃度時(shí)，它們?nèi)〈Y(jié)合的標(biāo)記抗原。隨后，將結(jié)合的抗原與未結(jié)合的抗原分離，并測(cè)量殘留在上清液中的游離抗原的放射性。RIA 方法的主要優(yōu)點(diǎn)是以*的精度和靈敏度測(cè)量分析物。

2.酶免疫分析 (EIA)

盡管酶免疫分析 (EIA) 的主要原理與 RIA 相似，但它使用酶作為標(biāo)記，而不是放射性同位素。在該測(cè)定中，酶分子通過(guò)合適的反應(yīng)偶聯(lián)到免疫分析試劑中，隨后進(jìn)行正常的免疫測(cè)定程序。

結(jié)合和游離部分分離后，通過(guò)添加底物測(cè)定酶活性。由于酶促反應(yīng)，形成有色產(chǎn)物，使用分光光度計(jì)對(duì)其進(jìn)行測(cè)量。測(cè)量的信號(hào)或產(chǎn)品顏色的強(qiáng)度類似于分析物的濃度。

3.熒光免疫分析 (FIA)

熒光免疫分析也與RIA的工作原理類似，只是標(biāo)記的是熒光團(tuán)而不是放射性同位素。FIA 分為異質(zhì)和均質(zhì)測(cè)定，這取決于是否需要分離步驟。這些測(cè)定可以以競(jìng)爭(zhēng)性或非競(jìng)爭(zhēng)性形式進(jìn)行。

異構(gòu)競(jìng)爭(zhēng)FIA方法用于測(cè)定生物樣品中的藥物，例如氨基糖苷類抗生素、尿液中的苯甲酰愛(ài)康寧、人血清中的甲狀腺素等。 

在抗體結(jié)合導(dǎo)致標(biāo)記分析物的熒光特性發(fā)生某些變化的情況下，使用均相競(jìng)爭(zhēng) FIA 方法。該方法還用于直接從反應(yīng)混合物中監(jiān)測(cè)分析物的濃度。

4.化學(xué)發(fā)光免疫分析 (CLIA)

化學(xué)發(fā)光免疫分析是以化學(xué)發(fā)光物質(zhì)作為標(biāo)記物。通常，發(fā)光是電子從激發(fā)態(tài)躍遷到基態(tài)時(shí)發(fā)出的可見(jiàn)光或近可見(jiàn)光輻射。該技術(shù)因其檢測(cè)限低、性能高和特異性好而越來(lái)越多地用于藥物分析。

5.脂質(zhì)體免疫分析 (LIA)

該免疫測(cè)定使用脂質(zhì)體封裝標(biāo)記物。脂質(zhì)體用于 LIA，與分析物或抗體偶聯(lián)，然后進(jìn)行正常的免疫測(cè)定過(guò)程。LIA 的檢測(cè)取決于釋放封裝標(biāo)記物的脂質(zhì)體的裂解。這些測(cè)量的標(biāo)記與分析物的濃度相關(guān)。 

6.毛細(xì)管電泳免疫分析 (CEIA)

毛細(xì)管電泳免疫分析是一種相對(duì)較新的技術(shù)，用于靈敏檢測(cè)分析物。該技術(shù)基于毛細(xì)管電泳分離和異質(zhì)免疫分析原理的結(jié)合。

CEIA 涉及抗體與作為固相免疫反應(yīng)器的微毛細(xì)管的修飾內(nèi)表面的共價(jià)結(jié)合。分析物的檢測(cè)基于免疫測(cè)定。這種方法非常靈敏，能夠檢測(cè)皮摩爾水平的分析物。

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