實(shí)驗(yàn)室數(shù)學(xué)在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析中一直是一個(gè)令人頭疼的問(wèn)題？在定量PCR實(shí)驗(yàn)中，常常會(huì)遇到計(jì)算 DNA 片段中的分子、計(jì)算溶液的濃度或計(jì)算連續(xù)稀釋等，這樣的計(jì)算有沒(méi)有什么好的方法呢？

當(dāng)然有了，在本文中，我們將教你簡(jiǎn)單的 DNA 樣本中的分子計(jì)數(shù)法。

——例如，套入公式即可一招輕松拆解：500 ng 樣本中有多少個(gè) 50 堿基對(duì) (bp) 片段的模板 /副本？這樣的棘手問(wèn)題。使您很快就會(huì)成為實(shí)驗(yàn)室中的計(jì)算高手！

一、計(jì)算 DNA片段中分子數(shù)量的應(yīng)用

在進(jìn)行以下類型的實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常需要DNA分子的計(jì)算：

DNA 連接。

生化分析。

實(shí)時(shí) PCR（絕對(duì)定量）。

測(cè)量載體基因組的數(shù)量。

二、分子數(shù)計(jì)算公式的原理

我們知道，單個(gè) DNA bp 的平均重量為 650 道爾頓。這也可以寫(xiě)為 650 g/mol（= 摩爾質(zhì)量）。因此，任何雙鏈 DNA 片段的分子量或摩爾質(zhì)量都可以通過(guò)將其長(zhǎng)度（以 bp 為單位）乘以 650來(lái)計(jì)算，答案將表示為道爾頓或 g/mol。

只要我們知道序列長(zhǎng)度（即基因組的長(zhǎng)度/大小），此計(jì)算將適用于任何物種的基因組 DNA。

三、實(shí)例與應(yīng)用：

1.實(shí)例問(wèn)題： 5.2-kb 質(zhì)粒的分子量是多少？記住 5.2 kb = 5200 bp

計(jì)算： 5200 bp x 650 道爾頓 = 3,380,000 道爾頓或 g/mol

現(xiàn)在我們知道如何計(jì)算 DNA 模板的分子量了。使用阿伏伽德羅數(shù)，即 6.022 x 10 ²³分子/摩爾，可以使用以下公式計(jì)算每份模板的分子數(shù)：

2.實(shí)例問(wèn)題：您有 300 ng 的 5.2-kb 質(zhì)粒。你的質(zhì)粒有多少 拷貝？

3.實(shí)例問(wèn)題：您有 50 ng 的 20-bp 引物。你的引物有多少份？

4.實(shí)例問(wèn)題：您有 150 ng 的 670 bp 純化 PCR 產(chǎn)物，你有多少份 PCR 產(chǎn)物？

注意：此公式基于您使用的是單一 DNA 物種的假設(shè)，因此在應(yīng)用于 PCR 產(chǎn)物或質(zhì)粒時(shí)，請(qǐng)確保您只有 1 個(gè)條帶或您有干凈的質(zhì)粒小量制備。

所以實(shí)驗(yàn)中，只要知道 DNA 片段的長(zhǎng)度和以納克為單位的濃度，您就可以輕松應(yīng)用該公式來(lái)獲得任何類型的 DNA 樣本中的拷貝數(shù)。

四、其他分子量計(jì)算常用的公式

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